小鼠內(nèi)臟組織樣品研磨提取核酸、微生物

近期的組織研磨和樣品處理分享、討論，我們邀請到了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測所老師給大家分享，內(nèi)容是——小鼠內(nèi)臟組織樣品研磨提取核酸、微生物，研磨使用的儀器是洛尚（LAWSON）組織研磨儀。

實(shí)例1：加裂解液直接勻漿

1、取適量組織裝入離心管，組織盡量剪碎成小塊；

2、在離心管中加入氧化鋯珠數(shù)顆（一次性使用）；

3、先加入Trizol（不建議加入太多 Trizol，液體體積過大影響勻漿效果），蓋好管蓋，裝入洛尚（LAWSON）組織研磨儀適配器中，安裝上機(jī)。

4、組織研磨儀研磨參數(shù)設(shè)置為一定轉(zhuǎn)速，研磨時(shí)間為2~5min（不同組織研磨時(shí)間不同，腦1min，肝臟、脾臟和腎臟2min、肺臟比較難研磨需3~5min，可能更長，中間應(yīng)停頓1~2次防止溫度過高，研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱預(yù)冷）；

5、再加入適量Trizol至總體積；

6、后面步驟按Trizol說明進(jìn)行。

實(shí)例2：先勻漿，再取一定量液體加裂解液進(jìn)行核酸抽提，本protocol適用提取小鼠組織中的病毒的核酸

1、取適量組織裝入離心管，組織盡量剪碎成小塊，樣品量較多時(shí)使用大離心管；

2、在離心管中加入氧化鋯珠數(shù)顆，使用大離心管時(shí)，可以將氧化鋯珠數(shù)量增加；

3、加入適量的滅菌PBS或生理鹽水，總體積為離心管單管體積的1/3~1/2為好，蓋好管蓋，裝入洛尚（LAWSON）組織研磨儀適配器中，安裝上機(jī)（研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱預(yù)冷）。

4、洛尚（LAWSON）組織研磨儀參數(shù)設(shè)置為一定轉(zhuǎn)速，研磨時(shí)間為1~5min（不同組織研磨時(shí)間不同，腦1min，肝臟、脾臟和腎臟2min、肺臟比較難研磨需3~5min，可能更長，中間應(yīng)停頓1~2次防止溫度過高），若研磨不充分，可以繼續(xù)研磨到充分為止；

5、一定溫度、轉(zhuǎn)速，離心數(shù)分鐘；

6、取上清液按照試劑盒說明書進(jìn)行后續(xù)提取步驟。 實(shí)驗(yàn)1中，我們之前試過一齊加1ml的Trizol，可能是體積過大，反而勻漿效果不好，所以就改成先加一部分裂解先勻漿，然后再補(bǔ)齊1ml體積。